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          Ames試劑盒 (鼠傷寒沙門氏菌營養缺陷型回復突變試驗試劑盒)

          2019-01-01發表

          重點產品-遺傳毒性試劑盒.jpg


                 Ames試劑盒是公司自主研發的一體化試劑盒產品,內含有Ames試驗所需的全部鼠傷寒沙門氏菌株(TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535)及培養基、組氨酸生物素、S9等試劑。本試劑盒中菌株及誘導S9加入保護劑后于-80℃保存,經復溶后可直接使用,省去了誘導S9的制備、菌株鑒定和活化培養等時步驟和時間。試劑盒經中國食品藥品檢定研究院、中國疾病預防控制中心及國家食品安全風險評估中心等多家單位使用,反應良好。


          品牌 貨號 產品名稱 規格 單價
          GTox Ames-V6.1 遺傳毒性Ames試劑盒 4菌版 200皿/盒 5500元
          GTox
          Ames-V6.2 遺傳毒性Ames試劑盒 5菌版 250皿/盒 6500元


          試劑盒應用范圍:
          可進行食品與飲用水、化學品、洗滌劑、消毒劑、食品添加劑、藥物殘留、化妝品、容器與包裝材料等遺傳毒理學檢測。

          試劑盒優勢:
          傳統試驗 周期長:培養基成分準備、誘導S9制備、菌株鑒定、菌株培養等耗費大量時間。
          穩定性差:雜菌污染、活菌數不符合要求、實驗試劑配置不準確都會導致實驗失敗。
          Ames試劑盒 便捷:省去培養基成分準備、誘導S9制備、菌株鑒定、菌株培養等時間,可直接使用,大大縮短試驗周期。
          準確:本試劑盒各成分均經過嚴格的質量檢測,無雜菌污染,菌株特性與活菌數目以及誘導S9活性均符合Ames試驗要求,實驗結果準確、可靠、重現性高。
          穩定:本試劑盒穩定性強、易于運輸和保存。


          購買方式:

          電話:010-61703898 轉804

          微信:直接掃描網頁右側微信二維碼添加購買



          Ames試劑盒產品手冊

          Ames 實驗概述

          沙門氏菌回復突變試驗(亦稱 Ames試驗)于 1975年建立并不斷發展完善,目前已被世界各國廣為采用,已經成為毒理學實驗室必需開展的重要實驗項目。Ames實驗用于檢測待分析物質的致突變作用,該驗靈敏、高效、檢測范圍廣。


          Ames 實驗原理
          Ames 試驗利用鼠傷寒沙門氏組氨酸營養缺陷型菌株,該缺陷型菌株不能合成組氨酸,故在缺乏組氨酸的培養基上,僅少數自發回復突變的細菌生長;假如有致突變物存在,則營養缺陷型的細菌誘導回復突變成原養型,因而能生長形成菌落,據此判斷受試物是否為致突變物。某些致突變物需要代謝活化后才能引起回復突變, 故需加入經誘導劑誘導的大鼠肝制備的 S9混合液。

          ames實驗原理.png



          試劑盒成分介紹及使用說明

           (×)

          瓊脂粉 Agar

          ×1

           

           

           

           

           

          室溫

          底層培養基 GS

          ×1

          氯化鈉

          ×1

          2-氨基芴 a

          ×1

          甲基磺酸甲酯 b

          ×1

          2,4,7-三硝基芴酮 c

          ×1

          1,8-二羥基蒽醌 d

          ×1

          S9 反應液 PS

          ×1

          S9 反應液 CS

          ×1

          底層培養基 VS

          ×1

          頂層培養基 HB 凍干球

          ×1

           

          -80 ℃下長期保存,可

           6 -20℃可

          短期保存,保 3

          周。請勿反復凍

          S9 混合物

          ×4

          TA97 油菌株

          ×1

          TA98 油菌株

          ×1

          TA100 油菌株

          ×1

          TA102 油菌株

          ×1

          a)  適用于 TA97TA98TA100,需 S9 

          b) 適用于 TA100TA102不需 S9 化;

          c)  適用于 TA97TA98,不需 S9  d)   適用于 TA102,需 S9 TA1535,TA1537  TA104 

          1. 誘導 S9 采用國際先進無菌凍干干燥工藝制成,實現了誘導 S9 酶活性的穩定保存,同時有效防止了細菌污染。實驗時用 S9 反 應液溶解混勻。   
          2. 實驗菌株采用先進工藝規模化制備,出廠前經過嚴格的質量檢測,低溫貯存條件確保了實驗菌株的長期穩定性。實驗時混 勻后即可直接使用,節省了菌株鑒定、活化處理以及菌液濃度調整等時間。     
          3. 實驗陽性對照試劑種類覆蓋整個 Ames 實驗要求,在添加和不添加 S9 的情況下均可以誘導實驗菌株呈現陽性反應。陽性對照 試劑采購自國際大品牌公司,按照 Ames 實驗需求精準定量分 裝,出廠前經過實驗檢測,陽性對照試劑的長期穩定性有質量 保證。
          4. 底層培養基 VS、GS 以干粉形式提供,便于培養基長期穩定 保存。使用前只需添加蒸餾水滅菌處理即可,試劑瓶采用耐高 溫材料,因此可以直接向試劑瓶中添加所需劑量的蒸餾水。
          5. 頂層培養基 HB 凍干球采用先進無菌凍干干燥工藝制成,使 用前需先用滅菌蒸餾水溶解,然后用 0.22μm 濾膜過濾除菌。

          試劑盒應用范圍 本試劑盒應用范圍非常廣,可進行食品與飲用水、化學品、洗滌劑、消毒劑、食品添加劑、藥物殘留、化妝品、容器與包裝 材料等遺傳毒理學檢測。

          傳統實驗操作不足
          周期長——培養基成分準備、誘導 S9 制備、菌株鑒定、菌株培養 等耗費大量時間。 穩定性差——雜菌污染、活菌數不符合要求、實驗試劑配制不準 確等都會導致實驗失敗。

          試劑盒優勢
          便捷—— 本試劑盒省去了培養基成分準備、誘導 S9 制備、菌株 鑒定、菌株培養等時間,可以直接使用,大大縮短了實驗周期。 準確——本試劑盒各成分均經過嚴格的質量檢測,無雜菌污染, 菌株特性與活菌數目以及誘導 S9 活性均符合 Ames 試驗要求,實 驗結果準確、可靠、重現性高。
          穩定—— 本試劑盒穩定性強、易于運輸和保存。

          試劑盒使用操作流程
          1. 實驗器材、試劑準備:三角瓶、5mL 或 15mL 試管、100μl 和1000μl 槍頭、0.22μm 濾膜、注射器、平皿、二甲基亞砜、滅菌 蒸餾水等;
          2. 設置待測物劑量,配制各劑量無菌待測物溶液;
          3. VS、GS 培養基加水溶解并滅菌,配制底層培養基;
          4. HB 球加滅菌蒸餾水溶解,充分混勻,然后過濾除菌;
          5. 實驗當天配制頂層培養基,2ml 分裝,然后 45℃水浴保溫;
          6. 用無菌蒸餾水溶解 S9 復合物并配制 S9 反應混合液;
          7. 開展 Ames 實驗,將 2mL 頂層培養基+100μL 菌液+100μL 待測 物或陽性底物+500μL10% S9 混合液混勻,傾倒于底層培養基(實驗室溫度低時傾倒的頂層培養基易冷凝,可將底層培養基 放置于 37℃培養箱一段時間,然后再傾倒頂層培養基);
          8. 待頂層培養基冷凝后,將實驗平皿放入 37℃培養箱,培養 48h后觀察實驗結果;

          試驗方法  試驗方法主要是平板摻入法和預培養平板摻入法,具體操作如下:

          1. 平板摻入法
          a) 準備所需底層培養基平皿若干。
          b) 融化頂層培養基分裝于無菌小試管,每管2 mL,在45℃水 浴中保溫。
          c) 在保溫的頂層培養基中依次加入測試菌株菌液0.1 mL,混 勻;加受試物0.05 mL~ 0.2 mL(一般加入0.1 mL。需活化時 另外再加入10 % S9反應混合液 0.5 mL),再混勻,然后迅 速傾入底層培養基上。轉動平皿,使頂層培養基均勻分布 在底層上,平放固化,37℃ 培養 48 h觀察結果。
          d) 另做一陽性對照、溶劑對照和未處理對照。陽性對照不加 受試物,只加標準誘變劑(即試劑盒陽性對照試劑,見表2);溶劑對照加除受試物和標準誘變劑以外的所有試劑, 如溶劑二甲基亞砜等(光譜純或分析純);未處理對照只 在培養基上加菌液;其他方法同上。
          2. 預培養平板摻入法 預培養對于某些受試物可取得較好效果。因此可根據情況確定 是否進行預培養。在加入頂層瓊脂前,先進行以下預培養步
          驟:在試驗中,將受試物(需活化時另加入10% S9反應混合 液)和菌液,在37℃中培養20min,或在30℃中培養30min,然 后再加2mL頂層瓊脂,其他同上述平板摻入法。

          試驗設計及受試物的特殊處理
          1) 劑量設計 決定受試物最高劑量的原則是受試物對試驗菌株的毒性和受試物的溶解度。對于純的化學物質,一般最低劑量為每平皿0.2 μg,最高劑量為 5 mg,或溶解度允許,或飽和濃度,或對細菌產生最小毒性濃度。對于毒性很低、攝入量很大的定型產品,可根據其溶解度和對細菌的毒性采用可能的最大劑量。每 種受試物在允許最高劑量下設4個(含4個)以上劑量,每劑量間隔不超過5倍,每個劑量應做三個平皿。
          2) 溶劑 溶劑可選用水、二甲基亞砜或其他溶劑(溶劑劑量應限定在毒性劑量以下。以二甲基亞砜為例,平板摻入法每皿不超過0.1mL 溶劑;預培養平板摻入法每皿不超過0.01mL 溶劑), 無論選用什么溶劑均應無誘變性。
          3) 對照組的設置 試驗應同時設有陽性物對照組、溶劑對照組和未處理對照,均 包括加S9和不加S9兩種情況。
          4) 受試物的特殊處理 若遇特殊受試物作非常規處理時應在報告中說明。對以下幾種情況可作如下處理:
          a)  含組氨酸受試物:根據食品中測得的組氨酸含量若能誘發 回復突變率的增高可加設組氨酸平行對照組;或將檢品經XAD-II樹脂柱過濾洗脫預處理。
          b)  食品包裝材料及其制品成分:根據材料或制品的組成成 分,可分別采取過篩抽提、蒸發殘渣等技術處理。
          c)  揮發性受試物:可采用真空干燥器處理等方法。
          d)  天然植物材料:可按植物化學方法制備粗制品或純制品。

          結果的判定 以直接計數培養基上長出回變菌落數的多少而定,如在背景生 長良好條件下,受試物組回變菌落數是溶劑對照回變菌落數的 兩倍或兩倍以上,并有劑量反應關系或至少某一測試點有可重 復的并有統計學意義的陽性反應,即可認為該受試物誘變試驗 陽性。受試物經上述四個試驗菌株測定后,只要有一個試驗菌 株,無論在加S9或未加S9條件下為陽性,均可報告該受試物對 鼠傷寒沙門氏菌為致突變陽性。如果受試物經四個試驗菌株檢 測后,無論加S9和未加S9均為陰性,則可報告該受試物為致突 變陰性。


          Ames 實驗報道文獻舉例
                 廣東省疾病預防控制中心通過 Ames 試驗發現部分染發劑引起試驗 菌株 TA97、TA98、TA100 回變率明顯升高,提示部分染發類 產品具有致突變作用,可對健康產生危害。何冬梅等、中 國 衛 生檢驗雜志 2007,17,(11)。
                 人參與女貞子是臨床上常見的有一定抗腫瘤效果的補益中藥,在 Ames 試驗中人參能抑制二氨基芴引起的 TA98 菌株回變菌落數的增加;女貞子能抑制疊氮鈉引起的 TA100 菌株回變菌落數的增加,分別表現出抗移碼型突變和抗堿基置換型突變的作用。倪婭等、中國保健 2009,17,(17)。生活飲用水經投加二氧化氯處理后對水中石油類污染物具有較 強的去除作用,可使水中有毒有害有致癌性的物質氧化降解為 毒性較小、無致癌作用的小分子物質,并且致突變活性明顯降低,Ames 值由陽性轉為陰性。高慶然等、工業用水與廢水2001,6。

                 喹烯酮是我國自主研發的喹噁啉類一類新獸藥,作為抗菌促生 長劑用于豬飼料中, Ames 試驗表明喹烯酮對 TA97、TA98、 TA100 和 TA1537 加和不加 S9 在一定劑量下均為陽性。結果提 示,喹烯酮存在一定致突變毒性,應制定最高殘留限量。張偉 等、毒理學雜志 2007,04。

                 Ames 試驗表明煤和液化石油氣(LPG)燃燒顆粒物均具有很強 的直接和間接致突變作用,主要致突變作用來源于硝基和胺基多環芳烴,兩種顆粒物同時存在可加大致癌風險。閆洪濤等、 中國公共衛生 2007,04。

                 烷基酚聚氧乙烯醚(APES) 是一大類表面活性劑家族,廣泛 用于家庭和工業的清潔產品,烷基酚類化合物是其降解產物, 其中對甲基苯酚、2,6-二甲基苯酚、4-乙基苯酚、4-辛基苯酚、對壬基苯酚、4-硝基苯酚、2-氯苯酚、1,3-二氯苯酚、2,4-二氯 苯酚、2,6-二氯苯酚、三氯苯酚和 2,3,5,6-四氯苯酚 12 種化合物 的 Ames 試驗表明除 2,4- 二氯苯酚未誘發各菌株的陽性反應外,其余 11 種待測物均誘發了陽性反應,說明這 11 種苯酚類化 合物均具有致突變性。楊麗等、東北師大學報(自然科學版)
          2003,01。

                 重組葡糖激酶作為一種生物技術藥物具有明顯的溶栓和抗凝效果,Ames 實驗結果顯示重組葡糖激酶對試驗菌株 TA97 、TA98、TA100 和 TA102 無誘發回變作用。劉永學等、癌變·畸變·突變 2004,9。

          常見問題及原因分析
          1、自發回變數顯著低于標準 原因:a. 試劑盒保存條件不合適,菌株失活或營養成分降解;b.培養基配制操作過程中組氨酸、生物素添加量低;c.操作過程中添加菌液時頂層培養基溫度過高;
          2、自發回變數顯著高于標準 原因:a. 培養基配制操作過程中組氨酸、生物素添加量高;b.培養皿經環氧乙烷消毒不徹底或環氧乙烷有殘留;
          3、陽性底物誘變菌落數偏離標準范圍 原因:a. 陽性底物溶解不徹底或未充分混勻;b. 陽性底物添加量不準確;c. 試劑盒保存條件不合適或過期,陽性底物降解或 S9失活;d. 操作過程中添加菌液時頂層培養基溫度過高;
          4、待測物誘變菌落數非常低或沒有菌落 原因:a. 待測物或待測物溶劑對細菌生長有毒性;b. 試劑盒保存條件不合適或過期,陽性底物降解或 S9 失活; c. 操作過程中添加菌液時頂層培養基溫度過高;
          5、菌落分布不均勻,集中偏向一側。原因: 倒底層或頂層培養基時平皿未水平放置;
          6、頂層或底層培養基凝固不充分或滑出平皿 原因:a. 頂層或底層培養基中瓊脂粉含量低;b. 頂層培養基中加入的溶劑或待測物酸化,導致凝膠不充分;
          7、如何判斷 Ames 實驗結果是否為假陽性 將經受試物和陽性對照物處理的 Ames 菌落進行增菌培養后接種于無組氨酸的培養基上,觀察比較細菌的生長情況。如果經受試 物處理的菌株不能生長在無組氨酸的培養基中,而經陽性對照物處 理的菌株則可以生長在無組氨酸的培養基上,則說明經受試物處理 的菌株沒有發生突變,試驗中所觀察到的菌落數增加是假陽性。



          重點產品-遺傳毒性試劑盒.jpg


                 Ames試劑盒是公司自主研發的一體化試劑盒產品,內含有Ames試驗所需的全部鼠傷寒沙門氏菌株(TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535)及培養基、組氨酸生物素、S9等試劑。本試劑盒中菌株及誘導S9加入保護劑后于-80℃保存,經復溶后可直接使用,省去了誘導S9的制備、菌株鑒定和活化培養等時步驟和時間。試劑盒經中國食品藥品檢定研究院、中國疾病預防控制中心及國家食品安全風險評估中心等多家單位使用,反應良好。


          品牌 貨號 產品名稱 規格 單價
          GTox Ames-V6.1 遺傳毒性Ames試劑盒 4菌版 200皿/盒 5500元
          GTox
          Ames-V6.2 遺傳毒性Ames試劑盒 5菌版 250皿/盒 6500元


          試劑盒應用范圍:
          可進行食品與飲用水、化學品、洗滌劑、消毒劑、食品添加劑、藥物殘留、化妝品、容器與包裝材料等遺傳毒理學檢測。

          試劑盒優勢:
          傳統試驗 周期長:培養基成分準備、誘導S9制備、菌株鑒定、菌株培養等耗費大量時間。
          穩定性差:雜菌污染、活菌數不符合要求、實驗試劑配置不準確都會導致實驗失敗。
          Ames試劑盒 便捷:省去培養基成分準備、誘導S9制備、菌株鑒定、菌株培養等時間,可直接使用,大大縮短試驗周期。
          準確:本試劑盒各成分均經過嚴格的質量檢測,無雜菌污染,菌株特性與活菌數目以及誘導S9活性均符合Ames試驗要求,實驗結果準確、可靠、重現性高。
          穩定:本試劑盒穩定性強、易于運輸和保存。


          購買方式:

          電話:010-61703898 轉804

          微信:直接掃描網頁右側微信二維碼添加購買



          Ames試劑盒產品手冊

          Ames 實驗概述

          沙門氏菌回復突變試驗(亦稱 Ames試驗)于 1975年建立并不斷發展完善,目前已被世界各國廣為采用,已經成為毒理學實驗室必需開展的重要實驗項目。Ames實驗用于檢測待分析物質的致突變作用,該驗靈敏、高效、檢測范圍廣。


          Ames 實驗原理
          Ames 試驗利用鼠傷寒沙門氏組氨酸營養缺陷型菌株,該缺陷型菌株不能合成組氨酸,故在缺乏組氨酸的培養基上,僅少數自發回復突變的細菌生長;假如有致突變物存在,則營養缺陷型的細菌誘導回復突變成原養型,因而能生長形成菌落,據此判斷受試物是否為致突變物。某些致突變物需要代謝活化后才能引起回復突變, 故需加入經誘導劑誘導的大鼠肝制備的 S9混合液。

          ames實驗原理.png



          試劑盒成分介紹及使用說明

           (×)

          瓊脂粉 Agar

          ×1

           

           

           

           

           

          室溫

          底層培養基 GS

          ×1

          氯化鈉

          ×1

          2-氨基芴 a

          ×1

          甲基磺酸甲酯 b

          ×1

          2,4,7-三硝基芴酮 c

          ×1

          1,8-二羥基蒽醌 d

          ×1

          S9 反應液 PS

          ×1

          S9 反應液 CS

          ×1

          底層培養基 VS

          ×1

          頂層培養基 HB 凍干球

          ×1

           

          -80 ℃下長期保存,可

           6 -20℃可

          短期保存,保 3

          周。請勿反復凍

          S9 混合物

          ×4

          TA97 油菌株

          ×1

          TA98 油菌株

          ×1

          TA100 油菌株

          ×1

          TA102 油菌株

          ×1

          a)  適用于 TA97TA98TA100,需 S9 

          b) 適用于 TA100TA102不需 S9 化;

          c)  適用于 TA97TA98,不需 S9  d)   適用于 TA102,需 S9 TA1535,TA1537  TA104 

          1. 誘導 S9 采用國際先進無菌凍干干燥工藝制成,實現了誘導 S9 酶活性的穩定保存,同時有效防止了細菌污染。實驗時用 S9 反 應液溶解混勻。   
          2. 實驗菌株采用先進工藝規模化制備,出廠前經過嚴格的質量檢測,低溫貯存條件確保了實驗菌株的長期穩定性。實驗時混 勻后即可直接使用,節省了菌株鑒定、活化處理以及菌液濃度調整等時間。     
          3. 實驗陽性對照試劑種類覆蓋整個 Ames 實驗要求,在添加和不添加 S9 的情況下均可以誘導實驗菌株呈現陽性反應。陽性對照 試劑采購自國際大品牌公司,按照 Ames 實驗需求精準定量分 裝,出廠前經過實驗檢測,陽性對照試劑的長期穩定性有質量 保證。
          4. 底層培養基 VS、GS 以干粉形式提供,便于培養基長期穩定 保存。使用前只需添加蒸餾水滅菌處理即可,試劑瓶采用耐高 溫材料,因此可以直接向試劑瓶中添加所需劑量的蒸餾水。
          5. 頂層培養基 HB 凍干球采用先進無菌凍干干燥工藝制成,使 用前需先用滅菌蒸餾水溶解,然后用 0.22μm 濾膜過濾除菌。

          試劑盒應用范圍 本試劑盒應用范圍非常廣,可進行食品與飲用水、化學品、洗滌劑、消毒劑、食品添加劑、藥物殘留、化妝品、容器與包裝 材料等遺傳毒理學檢測。

          傳統實驗操作不足
          周期長——培養基成分準備、誘導 S9 制備、菌株鑒定、菌株培養 等耗費大量時間。 穩定性差——雜菌污染、活菌數不符合要求、實驗試劑配制不準 確等都會導致實驗失敗。

          試劑盒優勢
          便捷—— 本試劑盒省去了培養基成分準備、誘導 S9 制備、菌株 鑒定、菌株培養等時間,可以直接使用,大大縮短了實驗周期。 準確——本試劑盒各成分均經過嚴格的質量檢測,無雜菌污染, 菌株特性與活菌數目以及誘導 S9 活性均符合 Ames 試驗要求,實 驗結果準確、可靠、重現性高。
          穩定—— 本試劑盒穩定性強、易于運輸和保存。

          試劑盒使用操作流程
          1. 實驗器材、試劑準備:三角瓶、5mL 或 15mL 試管、100μl 和1000μl 槍頭、0.22μm 濾膜、注射器、平皿、二甲基亞砜、滅菌 蒸餾水等;
          2. 設置待測物劑量,配制各劑量無菌待測物溶液;
          3. VS、GS 培養基加水溶解并滅菌,配制底層培養基;
          4. HB 球加滅菌蒸餾水溶解,充分混勻,然后過濾除菌;
          5. 實驗當天配制頂層培養基,2ml 分裝,然后 45℃水浴保溫;
          6. 用無菌蒸餾水溶解 S9 復合物并配制 S9 反應混合液;
          7. 開展 Ames 實驗,將 2mL 頂層培養基+100μL 菌液+100μL 待測 物或陽性底物+500μL10% S9 混合液混勻,傾倒于底層培養基(實驗室溫度低時傾倒的頂層培養基易冷凝,可將底層培養基 放置于 37℃培養箱一段時間,然后再傾倒頂層培養基);
          8. 待頂層培養基冷凝后,將實驗平皿放入 37℃培養箱,培養 48h后觀察實驗結果;

          試驗方法  試驗方法主要是平板摻入法和預培養平板摻入法,具體操作如下:

          1. 平板摻入法
          a) 準備所需底層培養基平皿若干。
          b) 融化頂層培養基分裝于無菌小試管,每管2 mL,在45℃水 浴中保溫。
          c) 在保溫的頂層培養基中依次加入測試菌株菌液0.1 mL,混 勻;加受試物0.05 mL~ 0.2 mL(一般加入0.1 mL。需活化時 另外再加入10 % S9反應混合液 0.5 mL),再混勻,然后迅 速傾入底層培養基上。轉動平皿,使頂層培養基均勻分布 在底層上,平放固化,37℃ 培養 48 h觀察結果。
          d) 另做一陽性對照、溶劑對照和未處理對照。陽性對照不加 受試物,只加標準誘變劑(即試劑盒陽性對照試劑,見表2);溶劑對照加除受試物和標準誘變劑以外的所有試劑, 如溶劑二甲基亞砜等(光譜純或分析純);未處理對照只 在培養基上加菌液;其他方法同上。
          2. 預培養平板摻入法 預培養對于某些受試物可取得較好效果。因此可根據情況確定 是否進行預培養。在加入頂層瓊脂前,先進行以下預培養步
          驟:在試驗中,將受試物(需活化時另加入10% S9反應混合 液)和菌液,在37℃中培養20min,或在30℃中培養30min,然 后再加2mL頂層瓊脂,其他同上述平板摻入法。

          試驗設計及受試物的特殊處理
          1) 劑量設計 決定受試物最高劑量的原則是受試物對試驗菌株的毒性和受試物的溶解度。對于純的化學物質,一般最低劑量為每平皿0.2 μg,最高劑量為 5 mg,或溶解度允許,或飽和濃度,或對細菌產生最小毒性濃度。對于毒性很低、攝入量很大的定型產品,可根據其溶解度和對細菌的毒性采用可能的最大劑量。每 種受試物在允許最高劑量下設4個(含4個)以上劑量,每劑量間隔不超過5倍,每個劑量應做三個平皿。
          2) 溶劑 溶劑可選用水、二甲基亞砜或其他溶劑(溶劑劑量應限定在毒性劑量以下。以二甲基亞砜為例,平板摻入法每皿不超過0.1mL 溶劑;預培養平板摻入法每皿不超過0.01mL 溶劑), 無論選用什么溶劑均應無誘變性。
          3) 對照組的設置 試驗應同時設有陽性物對照組、溶劑對照組和未處理對照,均 包括加S9和不加S9兩種情況。
          4) 受試物的特殊處理 若遇特殊受試物作非常規處理時應在報告中說明。對以下幾種情況可作如下處理:
          a)  含組氨酸受試物:根據食品中測得的組氨酸含量若能誘發 回復突變率的增高可加設組氨酸平行對照組;或將檢品經XAD-II樹脂柱過濾洗脫預處理。
          b)  食品包裝材料及其制品成分:根據材料或制品的組成成 分,可分別采取過篩抽提、蒸發殘渣等技術處理。
          c)  揮發性受試物:可采用真空干燥器處理等方法。
          d)  天然植物材料:可按植物化學方法制備粗制品或純制品。

          結果的判定 以直接計數培養基上長出回變菌落數的多少而定,如在背景生 長良好條件下,受試物組回變菌落數是溶劑對照回變菌落數的 兩倍或兩倍以上,并有劑量反應關系或至少某一測試點有可重 復的并有統計學意義的陽性反應,即可認為該受試物誘變試驗 陽性。受試物經上述四個試驗菌株測定后,只要有一個試驗菌 株,無論在加S9或未加S9條件下為陽性,均可報告該受試物對 鼠傷寒沙門氏菌為致突變陽性。如果受試物經四個試驗菌株檢 測后,無論加S9和未加S9均為陰性,則可報告該受試物為致突 變陰性。


          Ames 實驗報道文獻舉例
                 廣東省疾病預防控制中心通過 Ames 試驗發現部分染發劑引起試驗 菌株 TA97、TA98、TA100 回變率明顯升高,提示部分染發類 產品具有致突變作用,可對健康產生危害。何冬梅等、中 國 衛 生檢驗雜志 2007,17,(11)。
                 人參與女貞子是臨床上常見的有一定抗腫瘤效果的補益中藥,在 Ames 試驗中人參能抑制二氨基芴引起的 TA98 菌株回變菌落數的增加;女貞子能抑制疊氮鈉引起的 TA100 菌株回變菌落數的增加,分別表現出抗移碼型突變和抗堿基置換型突變的作用。倪婭等、中國保健 2009,17,(17)。生活飲用水經投加二氧化氯處理后對水中石油類污染物具有較 強的去除作用,可使水中有毒有害有致癌性的物質氧化降解為 毒性較小、無致癌作用的小分子物質,并且致突變活性明顯降低,Ames 值由陽性轉為陰性。高慶然等、工業用水與廢水2001,6。

                 喹烯酮是我國自主研發的喹噁啉類一類新獸藥,作為抗菌促生 長劑用于豬飼料中, Ames 試驗表明喹烯酮對 TA97、TA98、 TA100 和 TA1537 加和不加 S9 在一定劑量下均為陽性。結果提 示,喹烯酮存在一定致突變毒性,應制定最高殘留限量。張偉 等、毒理學雜志 2007,04。

                 Ames 試驗表明煤和液化石油氣(LPG)燃燒顆粒物均具有很強 的直接和間接致突變作用,主要致突變作用來源于硝基和胺基多環芳烴,兩種顆粒物同時存在可加大致癌風險。閆洪濤等、 中國公共衛生 2007,04。

                 烷基酚聚氧乙烯醚(APES) 是一大類表面活性劑家族,廣泛 用于家庭和工業的清潔產品,烷基酚類化合物是其降解產物, 其中對甲基苯酚、2,6-二甲基苯酚、4-乙基苯酚、4-辛基苯酚、對壬基苯酚、4-硝基苯酚、2-氯苯酚、1,3-二氯苯酚、2,4-二氯 苯酚、2,6-二氯苯酚、三氯苯酚和 2,3,5,6-四氯苯酚 12 種化合物 的 Ames 試驗表明除 2,4- 二氯苯酚未誘發各菌株的陽性反應外,其余 11 種待測物均誘發了陽性反應,說明這 11 種苯酚類化 合物均具有致突變性。楊麗等、東北師大學報(自然科學版)
          2003,01。

                 重組葡糖激酶作為一種生物技術藥物具有明顯的溶栓和抗凝效果,Ames 實驗結果顯示重組葡糖激酶對試驗菌株 TA97 、TA98、TA100 和 TA102 無誘發回變作用。劉永學等、癌變·畸變·突變 2004,9。

          常見問題及原因分析
          1、自發回變數顯著低于標準 原因:a. 試劑盒保存條件不合適,菌株失活或營養成分降解;b.培養基配制操作過程中組氨酸、生物素添加量低;c.操作過程中添加菌液時頂層培養基溫度過高;
          2、自發回變數顯著高于標準 原因:a. 培養基配制操作過程中組氨酸、生物素添加量高;b.培養皿經環氧乙烷消毒不徹底或環氧乙烷有殘留;
          3、陽性底物誘變菌落數偏離標準范圍 原因:a. 陽性底物溶解不徹底或未充分混勻;b. 陽性底物添加量不準確;c. 試劑盒保存條件不合適或過期,陽性底物降解或 S9失活;d. 操作過程中添加菌液時頂層培養基溫度過高;
          4、待測物誘變菌落數非常低或沒有菌落 原因:a. 待測物或待測物溶劑對細菌生長有毒性;b. 試劑盒保存條件不合適或過期,陽性底物降解或 S9 失活; c. 操作過程中添加菌液時頂層培養基溫度過高;
          5、菌落分布不均勻,集中偏向一側。原因: 倒底層或頂層培養基時平皿未水平放置;
          6、頂層或底層培養基凝固不充分或滑出平皿 原因:a. 頂層或底層培養基中瓊脂粉含量低;b. 頂層培養基中加入的溶劑或待測物酸化,導致凝膠不充分;
          7、如何判斷 Ames 實驗結果是否為假陽性 將經受試物和陽性對照物處理的 Ames 菌落進行增菌培養后接種于無組氨酸的培養基上,觀察比較細菌的生長情況。如果經受試 物處理的菌株不能生長在無組氨酸的培養基中,而經陽性對照物處 理的菌株則可以生長在無組氨酸的培養基上,則說明經受試物處理 的菌株沒有發生突變,試驗中所觀察到的菌落數增加是假陽性。



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